İmmobilize metal iyon afinite kromatografisi için poli(akrilamit-glisidil metakrilat-IDA) kriyojellerin hazırlanması ve karakterizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, GIDA MÜHENDİSLİĞİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ŞULE DAŞTAN
Danışman: Kemal Sarıoğlu
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Proteinlerin saflaştırılması, biyoteknoloji uygulamalarında önemli bir yere sahiptir. İmmobilize Metal İyon Afinite Kromatografisi (İMAK) His6-etiketli rekombinant proteinlerin saflaştırılmasında yaygın bir teknik olarak uygulanmaktadır. İMAK yönteminde destek materyalleri çeşitli jel ve reçine formunda ticari olarak üretilmekte ve kullanıma sunulmaktadır. Sunulan çalışmada kriyojel formunda İMAK destek materyalleri geliştirilmiştir. Bu çalışmada akrilamit (AAm), metilen bisakrilamid (MBA) ve glisidil metakrilat-iminodiasetik asit (GMA-IDA) konsantrasyonları bağımlı değişkenler olarak belirlenmiş ve deney tasarımı Design Expert 12.0.0 yazılımı ile hazırlanmıştır. Poli(akrilamit-glisidil metakrilat)-iminodiasetik asit (PAGMA-IDA) kriyojelleri serbest radikal kopolimerizasyonu ile sentezlenmiştir. Ardından sentezlenen PAGMA-IDA kriyojellerine Ni2+ adsorplanmıştır (PAGMA-IDA-Ni2+). Hazırlanan kriyojeller, Taramalı Elektron Mikroskop (SEM) görüntüleme, Fourier Dönüşümlü Kızılötesi Spektroskopisi (FTIR), şişme oranı, makro gözenek miktarı, Ni2+ adsorpsiyon miktarı analizleri yapılarak karakterize edilmiştir. Protein adsorpsiyon deneyleri model sistemlerde bovine serum albumin (BSA) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Yapılan analiz sonuçlarına göre en yüksek şişme oranı 66,39 g H2O/g kuru kriyojel olarak belirlenirken, maksimum makro gözenek ve adsorplanan BSA miktarı sırasıyla 41,3 g H2O/g kuru kriyojel ve 12,3 mg BSA/g kriyojel olarak belirlenmiştir. Ayrıca maksimum adsorplanan nikel miktarı da 83,1 mg/g kuru kriyojel olarak belirlenmiştir. Bu çalışmada, protein saflaştırma için hazırlanan PAGMA-IDA kriyojellerinin İMAK çalışmaları için uygun ve düşük maliyetli bir alternatif olabileceği gösterilmiştir. Anahtar Kelimeler: Protein saflaştırma, IMAK, His6-etiketli proteinler, kriyojeller, destek materyali