Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, VETERİNER GENETİK VE BİYOTEKNOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2024
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ERDİ UZUN
Danışman: Ülfet Çetinkaya
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, Encephalitozoon intestinalis (E. intestinalis) sporları ile stimüle edilen Madin Darby Canine Kidney (MDCK) hücrelerinde TLR gen ekspresyonlarındaki değişimin hücre kültürü ortamında araştırılması amaçlandı. Çalışmada üç grup oluşturuldu. Birinci gruba E.intestinalis için hazırlanan besiyeri eklendi ve kontrol grubu olarak kaydedildi. İkinci gruba +4 °C'de bekleyen 108 canlı spor eklendi. Üçüncü gruba ısı ile inaktive edilmiş 108 spor eklendi. Her üç grupta 37ºC'de % 5 CO2'li ortamda inkübe edildi. Bu gruplardan 1., 3., 6., 12. ve 24. saatlerde alınan örneklerden RNA izolasyonu ve cDNA sentezi gerçekleştirildi. Elde edilen cDNA'lardan TLR1-10 genlerinin ekspresyonları real time PCR ile değerlendirildi. Çalışmada housekeeping gen olarak GAPDH ve ACTB genleri kullanıldı. Bu iki genin ortalaması alınarak hedef genler normalize edildi ve 2-ΔΔCt formülü uygulanarak istatistiksel analiz yapıldı. Eşik değerinin (threshold 1) üzerinde tespit edilen genlerin ekspresyonun arttığı, eşik değerinin altında tespit edilen genlerin ekspresyonun azaldığı kabul edildi. İnaktive sporlar ile stimüle edilen hücrelerin gen ekspresyonlarında istatistiksel olarak anlamlı bir değişim görülmezken, canlı sporlar ile stimüle edilen hücrelerde TLR3 ve TLR4 gen ekspresyonlarında anlamlı bir artış görülmüştür. TLR3 gen ekspresyonunda birinci saatte anlamlı bir artış (kontrolün 1.6 katı) olduğu fakat üçüncü saatte ekspresyon düzeyinin azalmaya başladığı (kontrolün 1.4 katı), altıncı saatte ise kontrol seviyesine döndüğü gözlendi. TLR4 gen ekspresyonunun ise 24. saate kadar kontrole paralel gittiği 24. saatte ise anlamlı şekilde arttığı (kontrolün 2.1 katı) gözlendi. Sonuç olarak, bu çalışma E.intestinalis ile stimule edilen MDCK hücrelerinde on farklı toll like reseptörün ekspresyon değişimleri farklı saatlerde değerlendirildiği ve TLT3 gen ekspresyonunda değişimin bildirildiği ilk çalışmadır. Anahtar kelimeler: Encephalitozoon intestinalis, TLR, MDCK, Hücre kültürü, Gen ekspresyonu