Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, --, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2013
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ÖMER ERGİN
Danışman: Ebru Saatçi
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada Türkiye?de imal edilmiş peynirlerin, peynir altı sularında bulunan beta-kazomorfin-7 (ß-kazomorfin-7, BKM-7) peptiti indirek ELİSA ve ters-faz HPLC de analiz edilmiştir. Öncelikle ELİSA standart grafiğini elde etmek üzere, standart inek BKM-7 peptidi BSA ile gluteraldehit konjugasyon metoduyla konjuge edilmiştir. Optimize ELİSA metodu sonlandırılması 25. dk da, 405 nm dalga boyunda plaka okuyucu ile yapılmıştır. Elde edilen absorbans değerleri, 1:30 molar oranda BSA-BKM-7 peptit konjugatının 6.25-100 ng/ml aralığında 1/150 primer antikor ve 1/250 enzimatik işaret dilüsyonlarında bir seri standart BKM-7 eğrisine karşı hesaplanmıştır. ELİSA testinin hassasiyeti 23±5.3 ng/ml olarak bulunmuştur. 0.05-0.5 dilüsyon aralığındaki 9 çeşit peynir altı suyu BKM-7 miktarı optimizasyon sonrası indirek ELİSA metodu ile ölçülmüştür. C marka peynir örneği için bulunan BKM-7 miktarı absorbans BKM-7 standart eğrisi kullanılarak, 403.1 ng/ml olarak bulunmuştur. Diğer peynir sularında BKM-7 miktar hesaplaması için immün aktivite alınamamıştır. Ters-faz HPLC çalışmalarında, BKM-7?nin 220 nm dalga boyunda, 36-38. dk arasında maksimum absorbans verdiği gözlenmiştir. Elde edilen BKM-7 piklerinin konsantrasyonu, 0.0312-1.25 mM derişim aralığında standart eğrisine karşı hesaplanmıştır. Kullanılan filtrelerin geri kazanım katsayılarına göre (30000 MWCO için 0.9) yapılan iyileştirme ile A marka peynir altı suyundaki ortalama BKM-7 miktarı 12.5 ±2.35 µM ve karşılığı 10 ng/ml, B marka peynir altı suyundaki ortalama BKM-7 miktarı 35.1±3.93 µM ve karşılığı 28.1 ng/ml ve C marka peynir altı suyundaki ortalama BKM-7 miktarı 422.68 ± 4.16 µM ve karşılığı 338.15 ng/ml bulunmuştur. Çalışılan metotları karşılaştırdığımızda, ELİSA metodunun deteksiyon alt limiti 6.25 ng/ml olmakla beraber HPLC metodunun düşük konsantrasyonlarda, ELİSA?nın ise yüksek konsantrasyonlarda HPLC?ye göre daha iyi sonuç verdiği görülmüştür. C marka peynir altı suyu BKM-7 peptit miktarının HPLC ile tespit edilen miktarı ile ELİSA da tayin edilen miktarı yüksek tutarlılık göstermektedir. Çalışılan metotlar peptit tespiti ve ölçümü açısından birbirlerini desteklemektedirler. Pek çok hastalığın etmeni olan ve sağlık açısından her yönden önem ihtiva eden biyoaktif peptit BKM-7, şimdiye kadar geliştirilen diğer yöntemlerinin aksine, sindirim metabolizması çalışmaları ve ekstraksiyon yöntemleri dâhil edilmeden, çalışmamızda geliştirilen metotlarla peynirde direk olarak tespit edilmektedir. Buna bağlı olarak çalışmamız, marketlerde, A1 tip inek sütü ürünlerinin tespitine olanak sağlayan özel bir araştırma niteliği taşımaktadır. İnek sütünde A1 tip süt biyobelirteci niteliğindeki BKM-7? nin miktar tayini yapılabilinmesi yönünden geliştirilen analitik metot, günlük hayata uygulanabilirliği kuvvetle muhtemel inovatif bir çalışmadır.