Potansiyel mPGES-1 İnhibitörlerinin Antikanserojen Etkilerinin A549 Hücrelerinde Araştırılması

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Eren Demirpolat

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Mükerrem Betül AYCAN

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Çalışmamızda A549 küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücrelerinde Zingiber officinale'de bulunan 6-gingerol ile 6-shogaolün antikanser etkileri ve bu etkilerinin mPGES-1 (mikrozomal prostaglandin E2 sentaz 1), β-catenin, GSK3β (glikojen sentaz kinaz 3 β) yolağı üzerinden oluşup oluşmadığı araştırıldı. A549 hücrelerine 24 saat boyunca IL-1β (interlökin 1 β) uygulanarak mPGES-1 enzimi indüklendi. Deneyler hem IL-1β' ya maruz kalan hem de maruz kalmayan hücrelerde yürütüldü. Kurkumin bilinen doğal bir mPGES-1 inhibitörü olduğundan çalışmada pozitif kontrol olarak kullanıldı ve 6-gingerol ile 6-shogaolün etkileri kurkuminle kıyaslandı. Öncelikle A549 hücrelerinin büyüme profili çıkarıldı. MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) ve gerçek zamanlı hücre analizi (GZHA) deneyleriyle moleküllerin sitotoksik etkileri araştırıldı. Büyüme profili deneyi sonucunda IL-1β uygulanan hücrelerde uygulanmayanlara göre hücre proliferasyon hızının arttığı tespit edildi. Bu deneylere göre kurkumin ile 6-shogaolün sitotoksik etkili olduğu görüldü. 6-shogaol için 24 sa IC50 değeri 62 μM bulundu. IC50 değeri etrafında belirlenen dozlarda ise moleküllerle 24 sa inkübasyondan sonra western blot ile mPGES-1, GSK3β, p-GSK3β, β-catenin protein düzeyleri ve RT-PCR (real time polimeraz zincir reaksiyonu) ile aynı parametreler için mRNA düzeyleri ölçüldü. Bunlar sonucunda IL-1β' lı hücrelerde mPGES-1, p-GSK3β, β-catenin protein ve mRNA düzeylerinin yükseldiği, GSK3β düzeylerinin ise düştüğü görüldü (p<0,05/p<0,001). Ayrıca kurkumin ve 6-shogaol için IL-1β' nın ilgili protein-lerin düzeyinde yapmış olduğu değişimlerin geriye çevrildiği gözlenirken; 6-gingerol bu açıdan etkisiz bulundu. Meydana gelen değişimlerin PGE2 düzeyleri ile ilişkili olup olmadığının anlaşılması için PGE2 düzeyleri, hücrelerin indüklenmesinden başlayarak farklı zamanlarda alınan örneklerde ölçüldü. Buna göre PGE2 düzeyinin IL-1β uygulanan hücrelerde uygulanmayanlara göre yükseldiği; ancak bu etkinin zamanla azaldığı gözlendi. 6-shogaol ve kurkuminin antikanser etkilerinin PGE2 düzeyini düşürerek gösterdiği düşünüldü. Buna dayanarak 6-shogaolün özellikle 240 μM, kurkuminin ise 100 μM konsantrasyonda etkili olduğu ve 6-shogaolün mPGES-1 ile β-catenin inhibisyonu özellikleri açısından küçük hücreli akciğer kanseri tedavisi için potansiyel bir aday olabileceği gözlendi.