Bu çalışmada çeşitli eksplantlar (kotiledon nodları ve embriyo eksenleri), çeşitli büyüme
düzenleyicileri ve bu düzenleyicilerin farklı konsantrasyonları gibi parametrelerin
rejenerasyon ve transformasyona etkileri araştırılmıştır. Kotiledon nodlarının Agro-vakum
infiltrasyonu, çimlendirilmiş nohut tohumlarının Agroinokülasyonu, embriyonun
Agroenjeksiyonu ve yüzey sterilizasyonu yapılmış kuru nohut tohumlarının
Agrobacterium solusyonu ile imbibisyonu (şişirme, emdirme) olmak üzere dört farklı
transformasyon stratejisinin etkinliği denenmiştir. Transformasyon etkinliğine
Agrobacterium suşları, kokültüvasyon süresi, eksplantın gelişme evresi, yaralama,
infiltrasyon ve kültüvarlar gibi çeşitli parametrelerin etkisi araştırılmıştır. Transformasyon
etkinliği geçici GUS aktivitesine bakarak veya selektif ortamda yaşayan eksplantlara
dayanarak belirlenmiştir. Transgenlerin varlığı, ayda bir alt kültüre alınan selektif ortamda
3-4 ay seleksiyona tabi tutulmuş bitkilerde PCR analizleri ile belirlenmiştir. Test edilen
Agrobacterium tumefaciens suşları arasında (KYRT1, C58C1 ve EHA 101) en iyi yanıt
EHA 101 suşundan elde edilmiştir. Selektif ortamda elde edilen sonuca göre
transformasyona ise en iyi cevabı Er çeşidi vermiştir.
In this study, the effect of various parameters such as different explants (cotyledonary
nodes and embryo axes), different growth regulators (Benzylaminopurine and thidiazuron)
and their various concentrations have been investigated. Four different transformation
strategies namely; Agro-vacuum infiltration of cotyledonary nodes, Agroinoculation of
germinating chickpea seedlings, Agro-injection of seedlings and imbibitions of surface
sterilized dry chickpea seeds were also investigated. The effect of various parameters such
as, Agrobacterium strains, infection durations, explant developmental stage, injury,
infiltration and cultivars, on transformation efficiency were investigated. Transformation
efficiency was determined based on transient GUS activity or survival on selective media.
The presence of transgene was determined by PCR analysis on green plants subcultured
monthly on selective media for 3-4 times. The best response were obtained from EHA 101
among the tested strains of Agrobacterium tumefaciens (KYRT1, C58C1 and EHA 101).
Er was determined to be best responding cultivar according to the results obtained in
selective medium.