Akademik Veri Yönetim Sistemi
ATAVET-1. INTERNATIONAL (2. International Paticipants) STUDENT CONGRESS, Erzurum, Türkiye, 4 - 06 Aralık 2019, ss.1-2
ÖZET
Bu çalışmanın amacı naringin ve diosminin merinos ırkı koç spermasının dondurulabilirliği üzerine koruyucu etkilerinin immunfloresan ve biyokimyasal olarak incelenmesiydi. Bu anlamda, çalışma 2-5 yaşlı 6 baş ergin Merinos koçlardan suni vajen yardımıyla haftada iki kez, doğal yetiştirme mevsiminde 3 hafta süresince ejakülatlar alınarak yapıldı. Alınan ejakülatlardan uygun özellik (sperma yoğunluğu ≥3×109 spermatozoa/ml; motilite ≥% 80) gösterenler spermanın sulandırılması ve dondurulması işleminde kullanıldı. Spermaların sulandırılmasında Tris sulandırıcı kullanıldı. Ejakülatlar 32ºC’ta 6 eşit hacme bölünerek naringin (1, 2 ve 4 mM), diosmin (2 ve 4 mM) içeren ve antioksidan içermeyen (kontrol) Tris sulandırıcısıyla ml’de yaklaşık 4×108 spermatozoa olacak şekilde sulandırıldı. Sulandırma işlemini takiben sperma numuneleri 10 dakika oda ısısında tutuldu ardından polivinil alkolle kapatılmış 0.25 ml’lik payetlere çekilerek yaklaşık 3 saat +5oC’ta ekilibrasyona bırakıldı ve ekilibrasyonu izleyen süreçte sıvı azot buharında (~-100oC) 10 dakika dondurularak -196oC’taki sıvı azotta saklandı. Spermatolojik analiz için 24 saat sıvı azotta bekletilen payetler 37oC’ta 25 saniye süre ile çözdürüldü. Tablo 1 incelendiğinde motilite bulguları yönünden gruplar arasında bir fark yoktu (P>0.05). Ayrıca spermanın dondurulması sürecinde plazma membran bütünlüğü yönünden özellikle diosmin grubunun (2, 4 mM), naringin grubuna (1, 2, 4 mM) ve kontrol grubuna göre istatistiksel anlamda koruma sağladı. Akrozom bütünlüğü açısından diosmin 4 mM grubunun diğer gruplara göre istatistiksel olarak pozitif etkisi belirlenirken, mitokondriyel aktivite anlamında gruplar arasında herhangi bir fark kaydedilmedi. Yüksek Performanslı İnce Tabaka Kromatografi (YPİTK) metodu ile sperm membran lipid profil analizi yapıldı. İki farklı antioksidan (diosmin ve naringin) ve toplam 5 farklı doz göz önüne alındığında en yüksek fosfolipid oranlarının diosmin ilave edilen spermlerde olduğu tespit edildi. Doz göz önüne alındığında ise 4 mg/kg diosmin dozunun 2 mg/kg grubundan daha etkili olduğu sonucuna varıldı (Tablo 2). Sperm membran protein profilleri analizi sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) metodu ile gerçekleştirildi. Genel olarak farklı antioksidanların farklı sperm proteinleri üzerine değişik düzeylerde koruyucu etki gösterdiği görüldü (Tablo 6, tablo 7). Bunun sonucu olarak da farklı düzeylerde toplam protein miktarları tespit edildi (Tablo 7). En yüksek toplam protein miktarı N4 ve D4 gruplarında görüldü. Her ne kadar gruplar arası toplam protein miktarları istatistiksel olarak önemli olsa da oldukça büyük rakamlar görülmedi. Fakat antioksidan ilave edilmiş bütün sperm örneklerinin toplam protein miktarları – protein koruyucu etkileri kontrol grubundan daha yüksekti (Tablo 7). Patolojik incelemelerde, sperm hücresi DNA hasarı yönünden 8-OhDG antikoru ile hücre membran bütünlüğü yönünden ise Cu/Zn SOD antikoru ile immunfloresans yöntemle boyanarak incelendi. Kontrol, Diosmin 2, Diosmin 4, Naringin 1, Naringin 2, Naringin 4 gruplarında 8-OhDG pozitifliği nadir olarak görüldü (Şekil 5,6). Cu-Zn SOD pozitifliği kontrol grubunda az görülürken diğer tüm gruplarda daha yoğun olarak tespit edildi (Şekil 7,8). Pozitiflikler özellikle sperm hücrelerinin akrozom kısımlarındaydı. Çalışma 6 replikasyondan oluştu.
Anahtar Kelimeler: Diosmin, immunfloresan, lipid/protein profil analizi, naringin, sperm.