Köpeklerde distemper hastalığında TLR1-9 genleri ve miR-155 ekspresyonunun araştırılması


Doç. Dr. FADİME DALDABAN

Tez Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Zootekni ve Hayvan Besleme, Türkiye

Tez Danışmanı: Korhan Arslan

Tezin Onay Tarihi: 2020

Tezin Dili: Türkçe

Desteklendiği Program: Diğer

Özet:

Bu çalışmada, köpek distemper hastalığında, immun yanıt oluşmasında görevli Toll-Benzeri Reseptörleri 1-9 (TLR1-9) kodlayan genler ve microRNA-155 (miR-155)'in, hasta köpeklerde tedavi önce ve sonrasında ekpresyon düzeylerinin ve TLR 1-9, miR-155 ve hematolojik parametreler arasındaki ilişkinin belirlenmesi amaçlandı. Çalışmada incelenen hayvanlar Erciyes Üniversitesi Veteriner Fakültesi Eğitim Araştırma ve Uygulama Hastanesi klinikleri ve Kayseri'de bulunan özel kliniklerden temin edildi. Çalışma materyali 2-6 aylık yaşta, farklı ırk ve cinsiyette, distempere karşı aşılanmamış, Hızlı test kiti ve Revers Transkriptaz-Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) ile distemper pozitif olduğu belirlenmiş 20 köpek oluşturmuşdu. Göz ve burunda mukoprulent akıntı, öksürük ve ishal gibi belirtiler gösteren köpeklerden alınan nazal-okuler svap örnekleri kullanılarak yapılan hızlı kit uygulaması ile rutin tanı ve tedavi takibi amacıyla tedavi öncesi ve sonrası alınan kan örnekleri ile genetik ve hematolojik analizler gerçekleştirildi. Hasta köpeklere destek tedavi prosedürü uygulandı. Genetik analizler için plazma örneklerinden miRNA, tam kan örneklerinden mRNA izolasyonları yapıldı. Elde edilen mRNA ve miRNA'ların ekspresyon analizleri SYBR Green yöntemi ile yapıldı. Yapılan istatistiki analizler sonucunda, tedavi öncesine göre tedavi sonrasında TLR2, TLR4 ile miR-155 genlerinin istatistiksel olarak önemli düzeyde up regüle ve TLR5'in ise down regüle olduğu belirlendi (p<0.05). Hasta hayvanlardan alınan kan numulerindeki tedavi öncesi ve tedavi sonrası ortalama eritrosit hacmi (MCH), ortalama eritrosit hemoglobin konsantrasyonu (MCHC) ve platelet (PLT) değerlerinde istatistiksel olarak önemli fark olduğu gözlendi (p<0.05).Çalışma kapsamında incelenen genlerin ekspresyon düzeyleri ile hematolojik değerler arasında korelasyon katsayılarına göre tedavi öncesi grupta TLR2 geni ile monosit (MON) değeri, TLR4 geni ile PLT değeri arasında pozitif yönlü ilişki tespit edildi.Tedavi sonrası grup da ise TLR3 geni ile eritrosit (RBC) ve hemoglobin (HGB) değerleri arasında; TLR5 geni ile RBC, HGB ve hematokrit (HCT) değerleri arasında; TLR9 geni ile RBC ve HGB değerleri arasında pozitif yönlü güçlü ilişki; Buna karşı TLR1 geni ile MON ve nötrofil (GRAN) değerleri arasında; TLR3 geni ile HCT değeri arasında; TLR9 geni ile MON ve HCT değerleri arasında pozitif yönlü ilişki tespit edildi. Çalışmada miR-155'in tedavi sonrasında TLR8 gen ekspresyonu ile pozitif ilişkili olduğu görüldü. Elde edilen sonuçlar Canine distemper virus ile enfekte köpeklerde TLR8 ve miR-155 ile ilgili farklı çalışmaların yapılmasının bağışıklık mekanizmasının aydınlatılması ve tedavi protokolü oluşturulması açısından önemli olabileceği önerilebilir Sonuç olarak sunulan çalışmada, köpek distemper hastalığının biyolojik mekanizmasının aydınlatılması ile ilgili önemli sonuçlar ortaya konduğu ve elde edilen sonuçların konu ile ilgili yapılacak sonraki çalışmalara katkı sağlayacak nitelikte olduğu düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: miR-155, Köpek Distemper Virus, TLR, Gen Ekspresyonu.