Koyunlarda Bağışıklık Mekanizması ile İlişkili Bazı Genlerin Periferal Tek Çekirdekli Kan Hücrelerinde PBMC RealTime Ekspresyon Analizi Yöntemi ile İncelenmesi


Doç. Dr. ESMA GAMZE AKSEL

Tez Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Erciyes Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Zootekni ve Hayvan Besleme, Türkiye

Tez Danışmanı: Bilal Akyüz

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Desteklendiği Program: Diğer

Özet:

Gelecekte dogal kaynaklarda azalma ve küresel ısınma sebebiyle entansif hayvan

yetistiriciliginden ekstansif hayvan yetistiriciligine dogru yönelim olacagı

düsünülmektedir. Dolayısıyla ekstansif hayvancılıgın sürdürülmesi için yasadıgı

bölgelere adapte, olumsuz çevre kosullarına dayanıklı ve hastalıklara dirençli yerli

hayvan ırklarının önemi giderek artacaktır. Bu çalısmada Akkaraman ırkı kuzulara

bagısıklık sistemini uyaran Lipoteikoik asit (LTA, 50 μg/kg), Lipopolisakkarit (LPS, 20

μg/kg) ile LTA-LPS karısımı (50 μg/kg + 20 μg/kg) ve PBS (kontrol, 250 μl) intranazal

yolla uygulanmıstır. Aynı bakım ve besleme sartlarında bulunan toplam 28 bas

Akkaraman ırkı (üç aylık) kuzu LTA (n=7), LPS (n=7), LTA+LPS (n=7) ve kontrol

grubu (n=7) olacak sekilde dört gruba ayrılmıstır. Uygulama sonrası 24. saat ve 7.

günde izole edilen periferal tek çekirdekli kan hücrelerinde (Peripheral blood

mononuclear cells, PBMC) immun yanıtın olusumunda görev alan TLR2, TLR4,

MyD88, TRAF6, TNF-, IL-1ß, IL-6, IL-10, NF-ß, IFN genlerinin ve house-keeping

genlerden GAPDH ve ß-actin’e göre ekspresyon farklılıklarının incelenmesi

hedeflenmistir. Yapılan qRT-PCR analizi sonucunda; 24. saatte izole edilen PBMC

hücrelerine ait mRNA ekspresyon analizinde tüm gruplarda TLR2 [LPS (P<0.05) ve

LTA+LPS (P<0.01)] TLR4 [LTA+LPS (P<0.05)], TNF-, IL-10 [LTA+LPS (P<0.05)]

ve IFN genlerine ait ekspresyon verilerinde artıs belirlenirken bu genlerin 7. gün

ekspresyon seviyelerinde azalıs gözlenmistir. Elde edilen sonuçlara göre Akkaraman

ırkı kuzularda intranazal yolla uygulanan LTA ve LPS dozlarının ayrı ayrı ve bir arada

uygulanmasının özellikle TLR2 ve TLR4 gen ekspresyonunda 24. saatte artıs sagladıgı

dolayısıyla planlanan in vivo deneysel uygulamanın koyun PBMC’lerini basarılı bir

sekilde etkinlestirdigi belirlenmistir. Koyun ırkları arasında hastalıklara dirençliligin

belirlenmesi için farklı ırkların çalısıldıgı daha fazla çalısmaya ihtiyaç duyulmaktadır.

Yapılan deneysel uygulama dozları farmakoloji ve mikrobiyoloji alanlarında

planlanacak in vivo ve in vitro ilaç ve ası gelistirilmesi çalısmalarına yardımcı

olabilecektir. Ayrıca elde edilen sonuçlara göre hem çiftlik hayvanlarında görülen

solunum sistemi enfeksiyöz hastalıkları yönünden hem de koyunun biyomodel hayvan

olması bakımından insan ile ilgili planlanacak çalısmalara da katkı saglayabilecegi

sonucuna varılmıstır.