Clostridium Difficile Patojeninin DNA İzolasyonu, Saflaştırması ve Amplifikasyonu Olmadan QCM Sensör ile İnsan Dışkısı İçerisinde Genetik ve Toksijenik Tespiti


Creative Commons License

SOYLU M. Ç. (Yürütücü), YÜKSEL M. E., ATALAY M. A.

TÜBİTAK Projesi, 2018 - 2020

  • Proje Türü: TÜBİTAK Projesi
  • Başlama Tarihi: Mart 2018
  • Bitiş Tarihi: Mart 2020

Proje Özeti

Clostridium difficile enfeksiyonu, erken teşhis edilmediği ve uygun tedaviye başlanmadığı takdirde sağlık problemlerine ve ölüme yol açabilen önemli bir enfeksiyondur. En uygun teşhisin, bakterinin genetik ve toksijenik tespitiyle mümkün olduğu, ancak böyle bir klinik tespit metodunun olmadığı, son yıllarda yapılan bilimsel çalışmalarda vurgulanmaktadır. Bu çalışmada, Kuvars Kristal Mikroterazi sensör ile aynı anda genetik ve toksijenik tespite imkân tanıyacak bir sistem kurgulanmıştır. Sinyal/Gürültü oranı 3’ten büyük olacak şekilde tasarlanan tespit sisteminin en uygun yüzey modifikasyonu 11-Mercaptoundecanoic asit kaplama ajanının sağladığı görülmüştür. Model tespit ortamında genetik ve toksijenik tespit için sistem optimize edilmiştir. Sistem, tcdB geni tespiti için 105 CFU/ml ve toksin B antijeni tespiti için 0,1 ng/mL hassasiyet sınırında çalışabilecek şekilde optimize edilmiştir. İnsan dışkısı içerisinde yapılan tcdB geni ve toksin B deneyleri sonucunda, sistemin % 83,33 hassasiyet ve % 75 spesifisiteye sahip olduğu belirlenmiştir. PCR ve immünokromatografik kart testi ile teyit edilen sonuçlara göre %95 güven sınırında en düşük konsantrasyonlar olan 105 CFU/ml ve 0,1 ng/mL ve bunların negatif kontrolleri arasında istatistiki anlamlı bir fark vardır.